黄缘闭壳龟产卵孵化的对比试验

黄勇 ，郭良鑫 ，毕冠兰 ，欧阳鑫 ，贺胜利

（1.信阳市水产技术推广站，河南 信阳 464031;2.信阳市水产科学研究所，河南 信阳 464031）

黄缘闭壳龟（Cuora flavomarginata），别名黄缘盒龟，俗称夹板龟、断板龟、金头龟、黄板龟等，属爬行纲，龟鳖亚纲，龟鳖目，曲颈龟亚目，地龟科，闭壳龟属，其主要食性为杂食性，以动物性饵料为主，在野外条件下主要喜食蚯蚓、蛞蝓、蜈蚣、金龟子、蜗牛等，在动物性饵料缺乏时，也食些植物性饵料，如青菜叶、瓜果等；人工养殖可喂些动物肉、内脏、人工配合饲料以及西红柿香蕉等水果。黄缘闭壳龟为水陆两栖龟类，以陆栖为主，不能长时间生活在干燥的环境里，喜欢经常洗浴和饮水，多生活于山区丘陵地带，多见于阴暗潮湿有水的树根石缝等处。高温季节昼伏夜出，春秋两季在有阳光时，白天喜出来晒太阳，在气温低于10℃左右时，即进入冬眠状态。黄缘闭壳龟在野外生长条件下7—8龄后达到性成熟，在人工培育条件下可提前1～2年达到。其发情交配期在每年5—10月，集中产卵期信阳地区为5月中旬至7月中旬。雌龟正常每年可产卵1～2次，每次产卵1～4枚。近年来随着自然生态环境的不断恶化以及人类的滥捕滥捉等原因，致使黄缘闭壳龟野生种群数量急剧减少，因此开展黄缘闭壳龟救护繁殖等方面的研究具有十分重要的意义。作者在2018年对黄缘闭壳龟野生个体与人工培育子一代个体的产卵孵化做了对比试验，结果如下。

1 材料与方法

1.1 黄缘闭壳龟野生个体

亲龟是2006年来自信阳大别山区的野生个体，个体当时全部达到性成熟，人工饲养至今。龟龄为20—30龄，产卵12年以上，其中雌龟68只，平均体质量为925 g/只；雄龟26只，平均体质量为650 g/只。雄龟与雌龟在每年的4月下旬至7月中旬分开饲养，待雌龟结束产卵后合并在一起饲养，雌雄亲龟均自然交配，自然产卵。

1.2 黄缘闭壳龟人工培育子一代

亲龟是2009年野生个体繁育的子一代，人工饲养至今。亲龟体质健壮，体型饱满，外观漂亮，无伤无病，活泼好动，反应灵活，已全部达到性成熟，龟龄为9龄，产卵2～3年，其中雌龟68只，平均体质量为784 g/只；雄龟19只，平均体质量为532 g/只。雄龟与雌龟在每年的4月下旬至7月中旬分开饲养，待雌龟结束产卵后合并在一起饲养。雌雄亲龟均自然交配，自然产卵。

1.3 亲龟池的建造

野生个体与人工培育的子一代亲龟在自然条件相同的两个龟池内分开饲养。龟池均建在环境安静、背风向阳的地方，池长12 m，池宽5 m，池高0.6 m，池壁光滑，由水泥和砖块建成，并附有防逃檐。池底平整，由泥土建成，呈缓坡状，坡度10°左右。池内植有乔木和灌木，有常青落叶植被，占池内总面积的三分之二，有遮荫降温作用。龟池内建有龟休息区、产卵场、饮水洗澡区、活动区等不同的功能区，整个养殖区域模拟仿生态的自然环境建设。

1.4 亲龟的日常饲养及管理

待惊蛰后，气温稳定且平均值达到16℃以上时，于2018年4月28日的晴天上午将亲龟从越冬池内移到消过毒的饲养池内，雌雄亲龟分开饲养。投喂严格按照“四定”的要求，用浙江产的某牌金龟料、鲜虾、西红柿、胡萝卜、南瓜和珠海某牌龟鳖多蛋素等原料按照一定比例配比而成的饵料，按照体质量 1%～3%的日给饵率，于每日 15：00—17：00放入投饲盘内投喂，1 h左右吃完为宜。每天对饮水洗澡区进行清理，并及时注入新水，保证水质符合渔业养殖用水标准。每日早、中、晚对龟池巡视，观察龟的摄食、交配、产卵等活动，保持良好的生态环境，防止敌害生物的入侵、龟的逃逸，检查龟体有无病伤，及时发现疾病并准确诊断对症下药，认真做好生产日志记录。亲龟从2018年4月28日移出室外饲养至2018年11月15日进入越冬房冬眠，全年室外生产管理共计185 d。

1.5 龟卵的收集

黄缘闭壳龟的最适产卵气温是25～35℃。信阳地区为5月中旬至7月中旬，其中6月为产卵高峰期。在产卵期开始前，先将产卵场中25 cm厚的细沙彻底翻动一遍，然后喷洒适量的水，使沙层的含水量保持在7%左右。黄缘闭壳龟通常在傍晚产卵，管理人员每天傍晚时观察雌龟的产卵情况，确定产卵位置。次日清晨，在产卵场找到产卵窝后，用手轻轻扒开卵窝上的沙土，将龟卵小心取出轻放在盛卵器中，放置龟卵时避免龟卵的滚动、撞击、挤压、阳光直射等。采卵结束后，整理好产卵场，做好产卵记录。黄缘闭壳龟野生个体从5月14日产卵开始至7月19日结束，共产卵89窝，收集龟卵232枚；黄缘闭壳龟人工培育子一代从5月14日产卵开始至6月28日结束，共产卵49窝，收集龟卵133枚。

1.6 龟卵的孵化

1.6.1 孵化设施的前期准备 孵化房间面积为28 m2，具有良好的保湿保温效果，内装有排气扇、自动检测温湿度的设备。孵化箱为规格50 cm×50 cm×40 cm、底部及箱壁有通气孔的泡沫箱。孵化基质为直径0.4～0.6 cm的膨化蛭石。房间内另配有温度计、湿度计、淋水器、水桶等生产工具。

在产卵期开始前半月，将孵化房间彻底清扫并采取全室喷洒二氧化氯的方式进行杀菌消毒，将孵化箱用高锰酸钾进行浸泡后曝晒，将孵化基质进行曝晒消毒，最大限度营造无菌环境。

1.6.2 龟卵的人工孵化 孵化前，在每个泡沫箱内装入4 kg蛭石，并按照每1 kg蛭石淋入0.7 kg纯净水的比例调配好，放入龟卵后在箱体上用记号笔标注产卵日期、产卵池号、窝数、卵编号等。为了便于观察龟卵的发育情况，2018年采用了半裸露孵化法进行孵化。将受精卵的动物极向上、没有显现受精的卵可随意平放，轻轻覆上基质，使龟卵面的中央部分约1/6裸露在空气中，然后盖上箱盖。在整个孵化过程中，孵化箱不采取任何加温加湿措施，使龟卵在房间中正常孵化直至破壳出苗。

在孵化过程中，不随意翻动受精卵，以免造成胚胎死亡。室内空气干燥时，及时向空气中喷洒水雾，使室内的湿度在孵化期内始终保持在75%～99%。每日早、晚各巡视1次，检查湿度、温度、空气流通性、受精卵发育、破壳出苗等情况，及时清除霉变、坏死及未受精的卵，防止蛇、鼠等敌害生物的危害，并做好孵化记录。

1.7 稚龟的收集

受精卵发育到第6胚胎期时，胎体各器官基本发育成形，对于外界刺激开始有反应，即将破壳时，稚龟用喙轻啄蛋壳，啄出小洞再逐渐扩大，经过1～2 d可破壳而出。破壳后，稚龟会迅速钻入蛭石中。第2天取出稚龟，放入20 g/m3的高锰酸钾溶液中浸泡10 min，随后将清洗过的稚龟，按照每平方米50只的密度放入消过毒的稚龟饲养箱中进行饲养管理。对于少量卵黄囊吸收不彻底的稚龟，放入无菌器具中，1～3 d后卵黄囊可自行吸收干净。

2 结果

2.1 黄缘闭壳龟野生个体

野生个体雌龟68只，雄龟26只，产卵时间为2018年5月14日至2018年7月18日。在整个孵化期，孵化室内空气平均湿度为83.6%，空气平均温度为29.1℃，野生个体所产龟卵孵化的有效积温为2 062～2 308度日。产卵及受精孵化情况见表1。

表1 野生个体的产卵及受精孵化情况统计表

2.2 黄缘闭壳龟人工培育子一代个体

人工培育子一代个体雌龟68只，雄龟19只，产卵期为2018年5月14日至2018年6月27日。在整个孵化期，孵化室内空气平均湿度为83.6%，空气平均温度为29.1℃，人工培育子一代个体所产龟卵孵化的有效积温为2 016～2 336度日。黄缘闭壳龟人工培育子一代个体产卵及受精孵化情况见表2。

表2 人工培育子一代个体的产卵及受精孵化情况统计表

3 讨论

由表1可知，野生黄缘闭壳龟雌龟共计产卵232枚，平均每只雌龟产卵3.41枚，平均每枚龟卵体质量16.87 g。由表2可知，人工培育子一代雌龟共计产卵133枚，平均每只雌龟产卵1.96枚，平均每枚龟卵体质量11.32 g。对比发现，无论在雌龟平均产卵数量还是在产卵平均体质量方面，野生个体雌龟都要优于人工培育子一代个体雌龟，说明野生个体雌龟的生育能力远优于人工培育子一代个体雌龟。造成这一现象的原因可能有以下3个方面：一是野生个体被捕获时已达性成熟，体质健壮，生命力顽强，人工培育子一代个体由野生个体交配所产，经人工培育而达性成熟，故在物种基因遗传繁育性方面有一定差别；二是野生个体的平均体质量为828 g/只，人工培育子一代个体的平均体质量为729 g/只，野生个体的平均体质量大于人工培育子一代个体；三是野生个体龟龄为20—30龄，都产卵10年以上，可能正处于产卵较理想的龟龄；人工培育子一代个体龟龄为9龄，才产卵2年左右，可能正处于初产期，野生个体的生殖系统比人工培育子一代个体的生殖系统更加成熟稳定。

野生黄缘闭壳龟所产卵的受精率为73.71%。人工培育子一代黄缘闭壳龟所产卵的受精率为48.12%。对比发现，野生个体所产卵的受精率要远远高于与子一代个体所产卵的受精率。这种现象可能由以下3种原因造成：一是野生个体雄龟与雌龟的配比为1.0：2.6，人工培育子一代个体雄龟与雌龟的配比为1.0：3.6，野生个体的雌雄配比更为合理；二是野生个体的雄龟和雌龟在一起饲养10年以上，群体结构相对稳定不变，雄龟和雌龟间的信息交流更为顺畅；三是野生个体雄龟的生殖系统发育成熟稳定，个体平均体质量更大，其精子的结和力更强更有旺盛。

野生黄缘闭壳龟所产卵的孵化率为88.30%，人工培育子一代黄缘闭壳龟所产卵的孵化率为89.06%。二者所产卵的孵化率基本接近，但孵化率仍然不高。可能由以下3个原因造成：①雄龟的体质不够强壮，精子质量欠佳，致使卵子出现弱精或不受精的现象；②受精卵在室内自然孵化，较易受外界温度、湿度等因子的变化影响；③工作人员的生产管理操作不规范，造成受精卵的受伤、滚动、破损、细菌感染等情况的发生。

综上，可以从以下5个方面来提高黄缘闭壳龟的产卵量、受精率及孵化率：①科学引进种龟。选择种龟时尽量选择个体大，活力强，基因纯正的个体，不要选择杂种和近亲繁育个体；②加强亲龟的培育。营造良好的仿生态环境，合理投喂全价配合饲料，及时做好疾病的诊治和预防，保证亲龟的健壮体质；③合理搭配雌雄配比。尽量使雄龟和雌龟的配比保持在1：2左右，最大限度保证雌龟和雄龟的交配效率；④确保雄龟和雌龟搭配的稳定性。保证龟池内群体结构相对稳定，不要随意引进和替换新龟；⑤掌握孵化关键技术。在人工孵化过程中，准确把握好所需温度、湿度，保证孵化室的通气性，做到精细管理，减少生态因子的变化对胚胎发育所造成的刺激。