卵形鲳鲹刺激隐核虫病组织病理学研究

陈福艳，梁万文，陈 明，黄 婷，李莉萍，雷爱莹，王 瑞，杨学明，罗洪林，欧阳贤华*

(广西水产科学研究院，广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室，广西 南宁 530021)

利用组织切片、HE染色和显微观察的方法，研究了卵形鲳鲹患刺激隐核虫病组织病理变化。组织切片结果可见，感染鱼的鳃和体表受到直接机械损伤；鱼体在缺氧状态下，入侵的刺激隐核虫有可能对机体产生某种毒素，也可能因刺激隐核虫感染而引发细菌或病毒继发性感染，造成肝、脾和肾脏不同程度的间接性损伤。表现为鳃部机能严重受阻，肝脏脂肪肝变性严重，肝索紊乱，血窦缩小或消失；脾脏组织结构不清晰，有充血、出血和坏死等症状；肾脏结构不清晰，肾小管及肾小体缩小，肾小管细胞融合(黏连)，组织间隙松散扩大，局部细胞坏死，存在脂肪粒。

卵形鲳鯵(Trachinotusovatus)；刺激隐核虫(Cryptocaryonirritans)；组织病理学

卵形鲳鲹(Trachinotusovatus)是我国新兴名特优海水养殖品种之一。近年来，卵形鲳鲹养殖业在福建、广东、海南、广西等沿海地区迅猛发展，而且随着深海网箱养殖技术的进步，该养殖业得到进一步发展。但随着养殖规模的不断扩大，各种病害暴发日益频繁，尤其是刺激隐核虫(Cryptocaryonirritans)病，严重威胁卵形鲳鲹养殖业的健康发展。目前由于该病尚无有效的治疗方案，因此造成每年秋季快上市的大规格成品鱼大批量死亡，且死亡率高达100%，这给养殖户造成巨大的经济损失[1-4]。国内外关于卵形鲳鲹刺激隐核虫病的报道诸多，如但学明[5]、黄玮[6]、陈添铮[7]等对卵形鲳鲹和刺激隐核虫进行了研究，满其蒙[8]、赵典惠[9]对细菌感染卵形鲳鲹组织病理学进行报道，但有关刺激隐核虫感染卵形鲳鲹组织病理学研究未见报道，因此笔者对其进行研究，旨在为该病的病理及防治研究提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 材料及仪器

鱼安定MS222，福尔马林，无水酒精、二甲苯、石蜡，Leica RM2235切片机，Nikon ECLIPSE 80i显微镜，立体显微镜YYL-440。

1.2 采样

试验鱼来源于钦州龙门港海水网箱养殖鱼，规格为(400±25)g。对健康鱼和患病鱼进行常规检查和流行病学调查，依据资料[10]对寄生虫进行诊断。

1.3 组织切片的制备及观察

选取健康鱼和感染鱼各6尾，经MS222麻醉后，用剪刀剪取鱼鳃组织，解剖刀切取皮肤、肝、脾和肾脏组织适量(3 mm×3 mm)，将各组织块置于10%的中性福尔马溶液浸泡24 h以上，然后用梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，HE染色，中性树胶封片[11]。Nikon ECLIPSE 80i显微镜观察拍照[12]。

2 结果

2.1 感染鱼的症状

感染鱼活动缓慢，食欲下降或不进食，呼吸困难，常用身体摩擦网片或用尾鳍拍打水面。体表黏液增多，宛如身披轻纱，局部出现红肿、充血和出血现象；部分鳍条充血、溃烂；鳃部暗红、肿胀、充血和出血，黏液增多而将鳃丝粘连成片(图1-2)。体表、鳍条和鳃部附着大量“小白点”(图1-1，图1-2)，镜检确诊为刺激隐核虫(图1-3，图1-4)。

注：1～2为感染鱼；3为刺激隐核虫附着鳃丝(×100)；4为包囊(×100)。
Notes：1～2 indicated infected fish；3 indicated parasitic gill filaments(×100)；4 indicated packaging(×100).

2.2 组织病理学观察

1)鳃组织：健康鱼的鳃部鲜红、黏液正常；鳃丝切片可见，鳃小片整齐且梳形排列，呼吸上皮细胞、柱细胞、血窦等结构清晰(图2-1)。感染鱼鳃部切片可见，由于刺激隐核虫感染，局部组织肿胀、组织增生，使鳃丝和鳃小片呈波浪状弯曲变形，局部细胞坏死和脱落，结构不完整(图2-2，图2-3)。鳃丝上附着大小不等的刺激隐核虫，局部组织被刺激隐核虫挤压或诱导组织细胞增生，阻碍血细胞流通(图2-2～图2-6)。

注：1.健康鱼切片HE×400(a.鳃丝软骨；b.鳃小片)；2.感染鱼鳃切片HE×200(a.鳃丝软骨；b.鳃小片局部肿胀、弯曲，细胞脱落)；3.感染鱼鳃切片HE×400(a.红肿/弯曲变形；b.细胞脱落)；4.感染鱼鳃切片HE×400(刺激隐核虫)；5.感染鱼鳃切片HE×400(刺激隐核虫)；6.感染鱼鳃切片HE×400(刺激隐核虫)。
Notes：1.The historigal section of healthy fish’s gill HE×400(a.gill filament，b.gill lamella)；2.The historigal section of infected fish’s gill HE×200(a.gill filament，b.local swelling and bending of gill lamella，cell shedding)；3.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(a.redness/bending and deformation，b.cell shedding)；4.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(Cryptocaryonirritans)；5.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(Cryptocaryonirritans)；6.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(Cryptocaryonirritans).

2)皮肌：健康卵形鲳鲹体表光滑、黏液较少。感染鱼皮肌组织切片可见，表皮层增厚，黏液细胞数量增多，分泌黏液亢奋，中间层增厚；小滋养体已进入中间层与生发层，真皮层和肌肉层没有发现刺激隐核虫(图3-1，图3-2)。

注：1.感染鱼皮肤组织切片HE×100(a.刺激隐核虫；b.表皮层)2.感染鱼皮肤组织切片HE×200(a.刺激隐核虫)。
Notes：1.The transverse of infected fish’s back skin HE×100(a.Cryptocaryonirritans，b.surface layer)；2.The transverse of infected fish’s back skin HE×200(a.Cryptocaryonirritans).

3)鳍条：健康鱼鳍条完整，无附着物。感染鱼的鳍条局部充血、溃烂，黏液增加，常附着脏物，肉眼可见附着刺激隐核虫(图4-1，图4-2)。

注：1.刺激隐核虫；2.充血。
Notes：1.Cryptocaryonirritans；2.Congestion.

4)肝脏：健康鱼与感染鱼肝脏脂肪变性，肝细胞肿胀，结构不清晰，胞浆内充满大小不等的空泡(脂肪滴)，有的细胞核被挤到一侧(图5-1)；感染鱼脂肪肝变性更明显，肝索结构紊乱，有的变小或消失；部分胰腺内有较大空泡，血管内有大量红细胞、白细胞，局部充血、淤血和水肿(图5-2)。

注：1.健康鱼肝脏切片HE×200；2.感染鱼的肝胰腺切片HE×400(a.肝肿胀；b.血窦变大；c.胰腺内瘀血、各种白细胞增多；d.大脂肪粒)。
Notes：1.The transverse of healthy fish’s liver HE×200；2.The transverse of infected fish’s hepatopancreas HE×400(a.liver swelling，b.sinusoid bigger，c.blood stasis in the pancreas and various leukocytes increasing，d.large fat granule).

5)脾脏：健康鱼的脾脏结构清晰，脾膜、红髓、白髓等排列整齐致密，脾小体结构清晰(图6-1)。感染鱼脾脏红髓与白髓的界限模糊不清，小梁、脾小体组织清晰，白髓内细胞减少，许多淋巴细胞坏死，脾血窦、间质散布红细胞，大静脉内出现大量红细胞，脾脏淤血(图6-2)。

注：1.健康鱼脾脏切片HE×400；2.感染鱼脾脏切片HE×200(a.小梁；b.脾索；c.脾血窦；d.淤积)。
Notes：1.The transverse of healthy fish’s spleen HE×400；2.The transverse of infected fish’s spleen HE×200(a. trabecula，b.splenic cord，c.splenic sinus，d.blood stasis).

6)肾脏：健康鱼肾脏组织结构完整清晰，肾小管、肾小球、肾单位等排列整齐(图7-1)。感染鱼肾脏结构模糊，局部充血，间质肿胀出血；有的肾小管、肾小球萎缩；肾小管内部轮廓不清晰，两边上皮细胞相互溶合粘连，有些坏死崩解；肾小管和肾小体存在少许空泡(脂肪滴)(图7-2)。

注：l健康鱼中肾切片HE×400(a.肾小体；b.近端小管；c.远端小管)； 2感染鱼中肾切片HE×400(a.间隙扩大；b.肾间质肿胀、出血；c.肾小管坏死；d.肾小管细胞溶合)。
Notes：1.The transverse of healthy fish’s mesonephros HE×400(a.renal corpuscle，b.proximal convoluted tubule，c.distal convoluted tubule)；2.The transverse of infected fish’s mesonephros HE×400(a.gap expansion，b.renal interstitium swelling and bleeding，c.uriniferous tubules necrosis，d.uriniferous tubules cell fusion).

3 讨论

从组织切片观察可知，刺激隐核虫对鱼鳃部的损伤是致命性的。一方面，由于刺激隐核虫的入侵，鳃部组织受刺激产生大量黏液，黏液覆盖整个鳃部，鳃丝粘连甚至溶合在一起，不利于鳃小片伸张，阻碍水体流通和气体的有效交换，也减少了有害物质的排泄，这是造成鱼窒息性死亡的外因之一；另一方面，鳃丝受损严重，引起局部肿胀、上皮组织增生，表现出鳃丝及鳃小片严重扭曲，局部细胞坏死和脱落，且有出血和充血现象，因此在鳃组织内部的血液循环不通畅，使作为主要呼吸器官的鳃组织难于进行气体交换，这是造成鱼缺氧的重要内因之一。此结果与雷曼红研究的多子小瓜虫感染金鱼的组织病理学结果相似[13]。临床观察到濒死的刺激隐核虫感染鱼表现出活动缓慢、呼吸困难的症状，表明鱼机体处于严重缺氧状态，最终窒息而亡[1-4，14]。

刺激隐核虫虽然没有寄生于卵形鲳鲹的各内脏器官，没有对其造成直接性机械损伤，但鱼体在缺氧状态下，入侵机体的刺激隐核虫有可能对机体产生某种毒素，也可能因刺激隐核虫感染而引发细菌或病毒继发性感染，使鱼体的鳃、肝、脾和肾脏受到不同程度损伤，生理机能出现紊乱，对机体造成伤害。研究[15-16]表明刺激隐核虫重度感染后，鱼体免疫因子的释放受到抑制或出现紊乱，使其免疫能力下降。组织切片结果表明感染卵形鲳鲹的肝、脾和肾脏组织的血管内红细胞局部增多，表现为不同程度淤血，血液循环不畅，局部组织肿胀，细胞增大或坏死，可见各组织器官发生不同程度的生理机能障碍、调节能力降低，可能进一步加速感染鱼死亡。

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