水产品中有机磷类药物残留量的测定

GB 31656.8-2021 食品安全国家标准

水产品中有机磷类药物残留量的测定

液相色谱－串联质谱法

前言

本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件系首次发布。

1范围

本文件规定了水产品中辛硫磷、巴胺磷、倍硫磷、马拉硫磷、二嗪农、敌百虫、敌敌畏、甲基吡啶磷、蝇毒磷残留量检测的制样和液相色谱串联质谱测定方法。

本文件适用于鱼海参、蟹和虾等水产品可食部分中辛硫磷、巴胺磷倍硫磷、马拉硫磷、二嗪农、敌百虫、敌敌畏、甲基吡啶磷和蝇毒磷残留量的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用本文件：不注日期的引用文件，共最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和的方法。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术话和定义。

4原理

试样中有机磷类药物的残的经酸化乙腈提取，经PSA吸附剂净化，液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。

5试剂与材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。

5.1 试剂

5.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。

5.1.2 乙酸（CH3CO0H）：优级纯。

5.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。

5.1.4 无水乙酸钠（CH3COONa）：优级纯。

5.2溶液配制

5.2.1 定容液：取乙腈150 mL，加水350mL甲酸0.5 mL，混匀。

5.2.2 1%乙酸乙腈：取乙腈990 mL，加乙酸10 mL，混匀。

5.3 标准品

5.3.1辛硫磷、巴胺磷、倍硫磷、马拉硫磷、二嗪农、敌百虫、敌敌畏、甲基吡啶磷和蝇毒磷：含量均≥98. 0% ，具体见附录A。

5.3.2倍硫磷-D6、马拉硫磷-D10、二嗪农-D10、敌敌畏-D6、甲基吡啶磷-D6和蝇毒磷-D10：浓度均为100 mg/L，具体见附录A。

5. 4标准溶液的制备

5.4.1标准储备液：在避光条件下，取有机磷类药物标准各适量（相当于各待测组分10 mg），精密称定，分别于10 mL棕色量瓶中，加乙腈（5.1.1）适量使溶解并稀释至刻度。分别配成浓度为1 mg/mL的标准储备溶液。-18 ℃以下保存，有效期6个月。

5.4.2混合标准中间液：分别量取标准储备液（5.4.1）适量，用乙腈（5.1.1）稀释，配成浓度分别为：巴胺磷10 mg/L、马拉硫磷10 mg/L、二嗪农10 mg/L、敌百虫10 mg/L、敌敌畏10 mg/L、甲基吡啶磷10 mg/L；辛硫磷20 mg/L、倍硫磷20 mg/L和蝇毒磷20 mg/L的混合标准中间液。0℃~4℃避光保存，有效期1个月。

5.4.3混合标准工作液：准确量取混合标准中间液（5.4.2）适量，用乙腊（5.1.1）稀释，配成浓度分别为：巴胺磷1 mg/L、马拉硫磷1 mg/L、二嗪农1 mg/L、敌百虫1 mg/L、敌敌畏1 mg/L、甲基吡啶磷1 mg/L；辛硫磷2 mg/L、倍硫磷2 mg/L和蝇赤磷2 mg/L的混合标准工作液。0℃~4℃避光保存，有效期1周。

5.4.4混合内标中间液：准确吸取内标标准物质溶液（5.3.2），用乙腈（5.1.1）稀释配制成马拉硫磷-D10、二嗪农-D10、敌敌畏-D6和甲基吡啶磷-D6均为5 mg/L， 倍硫磷-D6和蝇毒磷-D10均为10 mg/L的混合内标中间液， 0℃~4℃避光保存，有效期1个月。

5.4.5混合内标工作液：准确吸取内标中间液（5.4. 4），用乙腈（5.1.1）稀释配成马拉硫磷-D10、二嗪农-D10、敌敌畏-D6和甲基吡啶磷-D6 0. 5 mg/L， 倍硫磷-D6和蝇毒磷-D10 1 mg/L的混合内标工作液， 0℃~4℃避光保存，有效期2周~3周。

5.5材料

5.5.1 PSA（N-丙基乙二胺）吸附剂：颗粒直径为40μm~60μm。

5.5.2 PVDF（聚偏氟乙烯）滤膜：孔径为0.22μm。

6仪器和设备

6.1液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源。

6.2 电子天平：感量0.00001 g和0.01 g。

6.3均质机。

6.4离心机：转速不低于 8 000 r/min。

6.5超声波清洗器。

6.6 涡旋混合器。

6.7氮吹仪。

7试料的制备与保存

7.1试料的制备

取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。

a） 取均质后的供试样品，作为供试试料；

b） 取均质后的空白样品，作为空白试料；

c） 取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

7.2试料的保存

-18℃以下保存。

8测定步骤

8.1提取

取试样5 g（准确至±0.02 g） ，加混合内标工作液100μL（5.4.5）、1%乙酸乙腈（5.2. 2）25.0 mL、无水乙酸钠1 g（5.1.4），涡旋混合2 min，超声30 min，8 000 r/min离心10 min；取上清液，备用。

8.2净化

备用液加PSA吸附剂500 mg，涡旋振荡1 min，8 000 r/ min离心10 min；取上清液5.0 mL，45℃下氮气吹干，准确量取定容液1. 0 mL（5.2.1）溶解残渣，加PSA吸附剂200 mg，涡旋1 min，5 000 r/min离心10 min，取上清液过膜后，供液相色谱串联质谱测定。实验过程需要注意避免阳光直射，样品前处理完成后应及时上机检测。

8.3标准曲线的制备

准确量取适量混合标准工作液（5.4.3）及混合内标工作液20μL（5.4.5），用定容液（5.2.1）稀释成巴胺磷、马拉硫磷、二嗪农、敌百虫、敌敌畏和甲基吡啶磷浓度分别为10μg/L、20 μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L，辛硫磷、倍硫磷和蝇毒磷浓度分别为20μg/L、40μg/L、100μg/L、200μg/L、400μg/L、1000μg/L系列标准溶液，供液相色谱串联质谱测定。以各标准峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，以各标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。

8.4 测定

8.4.1色谱参考条件

a） 色谱柱：ACQUITYTM UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1. 7μm）；或相当者；

b） 柱温：40℃；

c） 进样量：10μL；

d） 流动相：A为乙腈，B为0.1%甲酸溶液，梯度洗脱程序见表1。

表1 流动相梯度洗脱程序

8.4.2 质谱参考条件

a） 离子化模式：大气压电喷雾离于源（ESF），正离子模式；

b） 电离电压：2.50KV；

c） 锥孔电压：30V；

d） 离子源温度：140℃；

e） 脱溶剂气温度400℃；

f） 脱溶剂气流速：900 L/h；

g） 锥孔反吹气流速：50 L/h；

h） 氩气流速：0.12 mL/min；其他参数见表2

表2待测物的监测离子

8.4.3 测定法

a）定性测定

在同样测试条件下，阳性样品的保留时间与标准工作液中待测物的保留时间偏差在±2.5%以内，且检测到的相对离子丰度，应当与浓度相当的校正标准溶液相对离子丰度一致。基峰与次强碎片离子丰度比应符合表3的要求。

表3定性确证时相对离子丰度的允许偏差

b）定量测定

取试样溶液和相应的标准溶液等体积进样测定，按内标法以标准曲线对样品进行定量。其中辛硫磷、倍硫磷以倍硫磷-D6为内标；巴胺磷、马拉硫磷以马拉硫磷-D10为内标；二嗪农以二嗪农-D10为内标；敌百虫、敌敌畏以敌敌畏-D6为内标；甲基吡啶磷以甲基吡啶磷-D6为内标；蝇毒磷以蝇毒磷-D10为内标。标准溶液、空白样品及加标样品的总离子流图参见附录A。

8.5空白试验

除不加试料外，均按上述测定步骤进行。

9结果计算和表述

试样中有机磷类药物残留量按公式（1）计算。

式中：

Cis——试样溶液中内标浓度的数值，单位为微克每升（μg/L）；

Cs——标准溶液中待测药物浓度的数值，单位为微克每升（μg/L）；

C'is——标准溶液中内标浓度的数值，单位为微克每升（ug/L）；

Ai——试样 溶液中待测药物的峰面积；

Ais——试样溶液中内标的峰面积；

As——标准溶液中待测药物的峰面积；

A'is——标准溶液中内标的峰面积；

V1——提取液体积的数值，单位为毫升（mL）；

V2——净化的上清液体积的数值， 单位为毫升（mL）；

V3——溶解残渣体积的数值，单位为毫升（mL）。

10方法的检测限、定量限、准确度和精密度

10. 1检测限和定量限

本方法的检测限：巴胺磷、马拉硫磷、二嗪农、敌百虫、敌敌畏、甲基吡啶磷均为5μg/kg，辛硫磷、倍硫磷和蝇毒磷均为10μg/kg。定量限：巴胺磷、马拉硫磷、二嗪农、敌百虫、敌敌畏、甲基吡啶磷均为10μg/kg，辛硫磷、倍硫磷和蝇毒磷均为20μg/kg。

10.2准确度

巴胺磷、马拉硫磷、二嗪农、敌百虫、敌敌畏、甲基吡啶磷在10μg/kg~500μg/kg添加浓度范围内，回收率为70%~110%；辛硫磷、倍硫磷和蝇毒磷在20μg/kg~1000μg/kg添加浓度范围内，回收率为70%~110%。

10.3精密度

本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤20%。