论文：黄颡鱼烂身病病原菌的分离及药敏实验

黄颡鱼烂身病病原菌的分离及药敏实验

孙昌飞 祭仲石 韦 艳 厉成新 王中清

黄颡鱼(Pseudobagrus fulvidraco)，属硬骨鱼纲（Osteichthyes）、鲇形目（Siluriformes）、鲿科（Bagridae）、黄颡鱼属（Pelteobagrus），广泛分布于我国分布长江、黄河、珠江和黑龙江等流域。黄颡鱼肉质细嫩，无肌间刺，味道鲜美，是消费者较青睐的淡水鱼之一。随着市场需求的不断扩大，黄颡鱼在江浙地区的养殖区域不多扩大，黄颡鱼病害也逐渐再增加，大大制约了黄颡鱼养殖的健康发展。由拟态弧菌引起的黄颡鱼烂身病，病鱼溜边，表皮有规则性溃烂，严重时全身皮肤溃疡，肌肉也发生严重溃烂，病鱼摄食量减少，是一种高致死性病害，该病不易发觉，发病时间长，难以治疗，是黄颡鱼养殖中常见的病害之一，给江浙地区黄颡鱼养殖造成重大损失。

2019年6月初，江苏大丰某黄颡鱼养殖塘暴发烂身病，通过取样分离病原菌，并对分离的病原菌进行药敏试验，根据药敏结果指导养殖户进行合理用药，取得良好的治疗效果。通过本文，以期为当地黄颡鱼养殖过程中烂身病的防治提供一定的参考。

1 材料与方法

1.1 材料

发病黄颡鱼于2018年8月取自大丰某黄颡鱼养殖场，发病鱼80g左右。实验用药敏纸片采购自杭州微生物试剂有限公司；微生物培养基为脑心浸液培养基（BHI），pH7.4±0.2，采购自OXOID。

1.2 致病菌的分离

在超净工作台中，从患病鱼肝、肾等组织处取样，用灭菌后的接种环分别在培养基平皿的边缘的四个点涂菌，以每个点开始划线至培养基平皿中的1/2。然后，再以到第二点划线至培养基平皿中的1/2，依次划线，直至将致病菌均匀密布于培养基平皿中。30℃培养24小时。挑选优势菌落接种于斜面培养基，30℃培养24 小时，4℃冰箱保存备用。从斜面培养基上挑取菌落，接种到BHI液体培养基中，30℃培养24小时。

1.3 药敏试验

采用纸片琼脂扩散法（K-B法），在超净工作台中，将分离到的致病菌用生理盐水制备成浓度约107～108cfu/mL细菌悬浊液，然后取100uL涂布于BHI平板，等待15分钟，将不同的药敏纸片均匀的贴在BHI平板上，30℃培养24 小时后，观察结果，量取抑菌圈直径，确定致病菌对各药物的敏感性。

2 结果

2.1 黄颡鱼烂身病发病情况

发病塘口位于江苏大丰某黄颡鱼养殖场，塘口面积15亩，南北朝向，四周土坡，水深1.5～2m，有完善的进排水配套设施。2019年6月8日开始，发现每天有几尾死鱼，死鱼体表有明显方形溃烂病灶，解剖后发现腹腔内有点状出血点，内脏出血，肝脏肿大，腹腔中有少量腹水。几天后，死亡量暴发性增加，突增至每天几百尾。

2.2 致病菌的药敏分析

分离出致病菌后，使用水产上常用的恩诺沙星、氟苯尼考、强力霉素、硫酸新霉素、氨苄青霉素、红霉素、复方新诺明和复方磺胺嘧啶等8种抗生素对分离的致病菌进行药敏实验，药敏实验结果见表1，结果表明，黄颡鱼体内分离的拟态弧菌对恩诺沙星、氟苯尼考最为敏感，对复方新诺明和氨苄青霉素等耐药。

表1 各抗生素药敏结果

3 讨论

近年来，随着水产养殖的规模越来越大，养殖密度越来越高，细菌性疾病暴发越来越频繁，每年给水产养殖业造成重大经济损失。同时我国的水产养殖户及相关技术人员缺乏科学的用药理念，还是按照传统经验进行治疗鱼类的细菌性疾病，有时病急乱投医，还有不少养殖户在使用抗生素进行细菌性疾病的预防，导致各类致病菌产生耐药性。黄颡鱼烂身是危害黄颡鱼养殖的主要病害之一，该病由拟态弧菌引起，由于黄颡鱼是底层鱼类，感染初期黄颡鱼躲藏于水底，养殖户较难发现，当死鱼浮出水面时，池塘中黄颡鱼的病情已经相对较重，病鱼摄食量减少，病鱼难以摄入药物进行治疗。

目前，治疗细菌性疾病，主要还是通过投喂抗生素，但如何选择正确的抗生素成为治疗成败的关键因素，而随着多年的抗生素使用，拟态弧菌已经对多种抗生素产生耐药性。药敏结果显示，该地区分离的拟态弧菌对氨苄青霉素和复方新诺明有很强的耐药性，对红霉素、强力霉素和硫酸新霉素等也有一定的耐药性。本文结果表明，拟态弧菌已对多种抗生素产生不同程度的耐药性，这是多年来水产养殖中抗生素乱用滥用造成的。

水产养殖户在治疗细菌性疾病时，应当科学地选择抗生素，通过药敏实验，选择致病菌最为敏感药物进行治疗，避免盲目用药导致疾病无法有效控制。药敏实验后，我们建议发病塘口选择恩诺沙星作为治疗药物，同时配合复合碘进行池塘消毒，隔天使用一次。拌服恩诺沙星后，病情得到有效控制，从每天死亡几百尾逐渐降低到几尾，8天后该塘口黄颡鱼停止死亡，继续拌服恩诺沙星2天进行巩固治疗。在发生细菌性疾病时，不能盲目地使用抗生素，要尊重科学，用科学的理念指导养殖用药，真正做到科学用药，减缓致病菌耐药性的产生。